В статье автор обобщает полезные биологические свойства триходермы и метаризиума, а также экспериментальным путем выделяет чистую культуру микроорганизмов на плотной питательной среде.

Ключевые слова: микропрепараты, грибы, природное земледелие, триходерма, метаризиум.

В природном земледелии для защиты растений от вредителей и болезней активно используют биологические микропрепараты, действующее начало которых энтомопатогенные и почвенные микроорганизмы.

Цель нашего исследования — выделить чистую культуру грибов Тrichoderma viride и грибы рода Metarhizium из биологических микропрепаратов для дальнейшего воспроизведения и применения в растениеводстве.

В своей работе мы использовали в качестве воспроизводимого микропрепарата «Триходерма вериде» производитель ООО «Ваше хозяйство» (Тrichoderma viride, штамм 471 ГНУ ВНИИСХМ РАСХН) и «Метаризиум Микс» производитель ИП Федоров Т.Ю (грибы рода Metarhizium).

Триходерма зеленая Тrichoderma viride — почвенный гриб, являющийся аэробным сапрофитом, активно воздействует на грибы из рода Bipolaris и Alternaria, а также является антогонистом бактерий, которые вызывают сосудистый бактериоз крестоцветных культур (бактерия Xanthomonas campestris pv. campestris (Pammel) Dowson).

В процессе жизнедеятельности триходерма выделяет целый ряд метаболитов, которые подавляют активность фитопатогенной микрофлоры.

Гриб стимулирует развитие на корнях азотофиксирующих бактерий, а также улучшает поглощение корневой системой микро- и макроэлементов.

Оптимальная температура для развития и размножения триходермы от + 22 ^º C до +34 ^º C. Она не оказывает токсикологическое воздействие на человека и животных. [3]

Грибы рода Метаризиум Metarhizium — почвенный энтомопатогенный гриб. Его также, как и триходерму можно встретить повсеместно.

Источником питания являются погибшие насекомые и хитиновый покров после метаморфоза. [4]

Метаризиум также атакует живые насекомые, прорастая в тело жертвы и вызывая заболевание «зеленая мускардина». Это микоз, который развивается в течении 4–10 дней с момента начала заражения. У инфицированных особей нарушаются процессы секреции слизи, рост и размножение. Они стремятся покинуть зону заражения. [5]

Этот гриб способен поразить около 200 видов насекомых-вредителей, которые обитают не только в почве, но и наземных частях растений. [4]

Токсикологическое действие на человека, а также на теплокровных животных и дождевых червей не оказывает. Не вызывает резистентности у насекомых-вредителей. [5]

По сравнению с химическими способами защиты, использование грибов в природном земледелии обладает целым рядом преимуществ:

— получение экологически чистой продукции,

— стимуляция роста и развития за счет биологически активных веществ, которые выделяют микроорганизмы в результате своей жизнедеятельности [1],

— обогащение почвы органикой и минеральными веществами в результате переработки растительный остатков [1],

— полное отсутствие химического ожога на листьях, цветах и корнях растений при использовании рабочего раствора микропрепарата даже со значительным превышением рекомендуемой дозировки.

— отсутствие резистентности у вредителей и патогенной микрофлоры. [5]

Залог успеха выращивания полезной микрофлоры в лабораторных и промышленных условиях заключается в стерильности оборудования, питательной среды и чистой культуры засеиваемых микроорганизмов. Последнего составляющего, зачастую, сложно достичь, так как на производстве микробиологических препаратов не всегда соблюдены технологические условия. В своей работе последствия таких нарушений мы часто наблюдаем. При выращивании грибов с использование в качестве исходного посевного материала промышленные биологические микропрепараты вместе с заявленным на пачке микроорганизмом высеваются дрожжи и другие незаявленные в составе микроорганизмы. Именно поэтому так важно вывести чистую культуру полезного гриба для дальнейшей работы по воспроизведению, наращиванию биомассы и непосредственному использованию.

Методика проведения эксперимента

Основные этапы эксперимента:

1. Посев биологических микропрепаратов «Триходерма вериде» и «Метаризиум Микс»

2. Выведение чистой культуры грибов.

Посев биопрепаратов и дальнейшее выделение чистой культуры грибов производились на питательной среде М9 с использованием в качестве источника макро- и микроэлементов универсального удобрения «Акварин».

Состав плотной питательной среды М9 [2]:

1 л дистиллированной воды

1,5 г универсального водорастворимого удобрения «Акварин»

20 г сахарозы

15 г агар-агара.

Стерилизация питательной среды происходила в воздушном стерилизаторе ГП-20-Ох-«ПЗ» 45 мин при 120°C.

Дальнейшие этапы работы проводились с использованием ламинарного шкафа. Питательную среду разливали в стерильные чашки Петри по 40мл, после чего производился посев грибов. Оптимальная температура выращивания грибов от + 22 ^º C до +34 ^º C. [3]. Оценку результатов проводили через 10 дней после посева.

Результаты исследования

Посев биологических микропрепаратов «Триходерма вериде» и «Метаризиум Микс».

Согласно вышеописанной методике результаты выращивания микробиологических препаратов в чашках Петри мы получили через 10 дней (рисунок 1).

На рисунке 1 хорошо видно, что загрязнение промышленных биопреператов посторонней микрофлорой присутствует. Из-за этого развитие триходермы и метаризиума угнетено.

Выведение чистой культуры грибов

Дальнейшая работа заключалась в выделении чистой культуры грибов из уже выращенных. Для этого мы произвели повторный посев с использованием в качестве посевного материала грибов из предыдущего опыта. Оценка результата производилась также через 10 дней с момента посева, как и в предыдущем опыте (рисунок 2).

При повторном посеве и отборе колоний грибов без посторонней микрофлоры из чашек Петри мы получаем чистую культуру, которую можно использовать в дальнейшем разведении (рисунок 2).

Таким образом, выделение чистой культуры на плотной питательной среде является важным этапом воспроизведения биологических микропрепаратов. Пренебрегая этим этапом, биопрепарат становится не только бесполезным в борьбе против вредителей и болезней растений, но даже опасным для человека из-за развития возможной сопутствующей патогенной микрофлоры.

Полученная чистая культура гриба применяется для массового воспроизведения и наращивания биомассы на жидких и твердых питательных средах с дальнейшим практическим применением в растениеводстве в качестве биологического средства защиты от болезней и вредителей.

Литература:

1. https://metarhizin.ru/micro-organismes/trichoderma-viride/
2. https://vuzbiochemi.elpub.ru/jour/article/view/334?locale=ru_RU
3. https://www.pesticidy.ru/active_substance/trichoderma_viride_471
4. http://prirodnoe-zemledelie63.ru/product/metarizin-50-g/
5. https://biopax.ru/articles/metarhizium_anisopliae/